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液相色谱特点及对流动相的要求

* 来源: 无锡赛那尔 * 作者: sainaer * 发表时间: 2021-04-28 8:15:27
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。

液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)。也称现代液相色谱。


HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:
速度快——通常分析一个样品在15~30 min,有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高——可选择固定相和流动相以达到zui佳分离效果。
灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng,荧光和电化学检测器可达0.1pg。
柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
样品量少,容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。
 

HPLC对流动相的基本要求是:
①与固定相不互溶,不发生化学反应。
②对样品有适宜的溶解度,要求k值在1~10范围内(可用范围)或2~5(zui佳范围)。溶解度太大,k值太小,不利于分离;溶解度太小,k值太大,可能使样品在流动相中产生沉淀。
③必须与检测器相适应。例如用紫外检测器,流动相本身在检测波长处应无吸收。
④流动相的粘度要小,可以降低色谱柱的阻力而提高柱效。
⑤纯度高,不含机械杂质。